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ct26細胞培養步驟與傳代方法的介紹
日期：2025-01-25 17:20
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摘要：
CT-26細胞是以N-nitroso-N-methylurethane-(NNMU)誘導形成的未分化結腸癌細胞株。它克隆形成的細胞株命名為CT26.WT(ATCC CRL-2638)。用包含編碼典型腫瘤相關抗原(TAA)beta-半乳糖苷酶(beta-gal)的lacZ基因的逆轉錄病毒載體LXSN穩定轉染CT26。即使CT26.CL25表達了典型的TAA beta-半乳糖苷酶，在正常小鼠中CT26.CL25和CT26.WT的生長率與致死率也保持基本一致。與CT26.CL25(ATCC CRL-2639)一起可用作測試免疫治療程序的模型，并用于研究宿主免疫反應。
1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
培養步驟：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。**天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
傳代方法：
1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。